Introdução: A hemocultura é o exame considerado padrão ouro para o diagnóstico de infecção de corrente sanguínea, sendo capaz de identificar bactérias em amostras de sangue. Uma amostra de hemocultura contaminada é caracterizada pela presença de microrganismos que foram introduzidos no sangue do indivíduo de forma não intencional, em alguma etapa do procedimento, seja na coleta ou no processamento do material em questão. Amostras falsamente positivas comprometem a confiabilidade dos resultados obtidos na análise e provocam repercussões como aumento do tempo de internação e respectivo aumento dos custos hospitalares. Objetivo: Descrever a experiência de utilização de ferramentas de melhoria da qualidade no processo de definição da oportunidade de melhoria a ser priorizada. Metodologia: Estudo descritivo do tipo relato de experiência, descrevendo o processo de delimitação da oportunidade de melhoria a ser trabalhada, visando a redução da taxa de contaminação de hemoculturas em um hospital da rede pública da região metropolitana do Rio de Janeiro. Resultados: A observação de uma taxa de incidência de infecção primária de corrente sanguínea laboratorial acima da média estadual, motivou uma investigação para identificar as oportunidades de melhoria relacionadas ao problema encontrado. Após brainstorming com time de especialistas e aplicação de uma matriz de priorização, foi definido como oportunidade a ser trabalhada a taxa de contaminação de hemoculturas acima do recomendado pela Anvisa. A elaboração de um diagrama de causa e efeito (Diagrama de Ishikawa) permitiu a visualização das causas apontadas para o problema, divididas em quatro categorias: pacientes, profissionais, infraestrutura e processos de trabalho. Duas dessas categorias, profissionais e processos de trabalho, mostravam causas com relação direta entre elas, como o não cumprimento do protocolo institucional e falhas de execução em uma etapa fundamental do procedimento, a antissepsia da pele. Conclusão: A utilização das ferramentas de qualidade foi fundamental para a identificação da causa que demonstrou maior expressividade nas etapas de análise, a execução do procedimento. Com base neste resultado, será realizada uma análise observacional desta etapa, para o levantamento dos pontos críticos de sua execução, permitindo o planejamento de forma direcionada da intervenção educativa a ser realizada, visando a redução da taxa de contaminação das amostras de hemocultura coletadas na unidade.