Introdução: O hipopituitarismo congênito (HC) caracteriza-se pela deficiência de 1 ou mais hormônios hipofisários. O sequenciamento completo do exoma (SCE) permitiu identificar variantes novas/raras em doenças genéticas. Dos pacientes com HC, 85% não possuem diagnóstico molecular. O SCE, em 10 pacientes com HC filhos de pais consanguíneos, identificou a variante homozigota (c.865G>A, p.V289I) rara no gene CDH2 (N-Cadherina), prevista como provavelmente patogênica pelos critérios da ACMG, em uma paciente com deficiência de GH, TSH, ACTH, LF/FSH e neurohipófise ectópica. A análise do CDH2 numa coorte de 219 com HC em um único centro, identificou 3 famílias não aparentadas com variantes em heterozigose sendo 2 novas, além da variante p.V289I. O efeito deletério da variante em homozigose nas propriedades de adesão celular, foi comprovado nos ensaios de tranfecção permanente em linhagens de fibroblastos L1. Para determinar o papel do gene cdh2 no desenvolvimento hipofisário, selecionamos o zebrafish como modelo animal devido a homologia genética de 75% com humanos. O knockout do cdh2 pela técnica de Crispr/cas9 levou a letalidade de 85% dos animais com 48 horas pós fertilização (hpf), impossibilitando analisar seu papel durante o desenvolvimento hipofisário. Objetivo: Produzir um modelo de knockdown do gene do cdh2 em zebrafish para análise fenotípica e molecular. Material e métodos: O plasmídeo pET28B-RfxCas13d-His foi transformado em bactéria, linearizado e seguido de transcrição in vitro para produção do mRNA Cas13. Três RNA guias, com alvo no gene cdh2, foram desenhadas para guiar a Cas13 ao alvo. O complexo Cas13/RNAguia foi injetado em embrião unicelular e análises fenotípicas foram realizadas em estereomicroscópio até 96 hpf. Para avaliar a expressão gênica do cdh2, prop1 e gh, por RT-PCR, os embriões foram coletados em 24, 48, 72 e 96 hpf. Resultados: Os animais com knockdown apresentaram malformação, edema cardíaco e microftalmia no período avaliado de 96 hpf. A expressão do cdh2 estava diminuída em 24h, do gh diminuída em 48h em relação ao selvagem e ambas apresentavam diferença estatística (p<0,05), porém a expressão do prop1 foi semelhante ao controle nos períodos analisados. Conclusão: O modelo de knockdwon do cdh2 no zebrafish utilizando a enzima Cas13, foi eficiente e apresentou fenótipo semelhante ao modelo knockout. A expressão de gh diminuída em 48h indica um importante papel do cdh2 na diferenciação terminal hormonal e esse achado deverá ser corroborado pela análise da expressão dos outros hormônios.
O 26º Congresso de Biólogos do CRBio-01 (26º ConBio) aconteceu no período de 4 a 6 de dezembro de 2023, com sessões presenciais no Centro Universitário das Américas (FAM), na cidade de São Paulo, que também foram assistidas online pelos participantes inscritos no evento.
O ConBio, realizado a cada dois anos, é promovido pelo Conselho Regional de Biologia - 1ª Região (CRBio-01), autarquia federal de orientação e fiscalização da profissão de Biólogo, com jurisdição nos estados de São Paulo, Mato Grosso e Mato Grosso do Sul.
O tema do 26º ConBio foi “Mudanças Climáticas e Saúde Única”.
O evento recebeu trabalhos científicos nas modalidades “Vídeo” e “Banner”. Os autores que são estudantes de graduação ou de pós-graduação em Ciências Biológicas e submeteram trabalhos na modalidade “Vídeo” concorreram ao Prêmio Bertha Lange de Morretes.
O 26º ConBio também recebeu trabalhos fotográficos que concorram a prêmios no 7º Concurso de Fotografia.
Comissão Organizadora
Conselho Regional de Biologia 1ª Região
Comissão Científica
Ferramenta completa de submissão, avaliação e publicação de anais para eventos científicos.
