Expressão e caracterização de uma Glutationa S-transferase Alfa de Rhipicephalus microplus

Expressão e caracterização de uma Glutationa S-transferase Alfa de Rhipicephalus microplus

• Autor
• Katiussa Paula Cover Ozelame
• Co-autores
• Charles Ndawula , Lucas Andre Dedavid e Silva , Itabajara da Silva Vaz Junior
• Resumo

• O carrapato Rhipicephalus microplus é um ectoparasita hematófago que causa perdas econômicas à bovinocultura. O controle do R. microplus é efetuado por acaricidas, contudo causam a seleção de populações resistentes de carrapatos e contaminam a carne e o ambiente. O uso de vacinas contra carrapatos é um método promissor, assim a compreensão da fisiologia do carrapato bovino e a identificação de proteínas com potencial para serem utilizadas como antígeno vacinal tem sido estudada. As glutationa S-transferases (GST) são um grupo de enzimas que exercem um papel central na detoxificação de compostos xenobióticos e endógenos. O presente trabalho pretende expressar de forma recombinante e caracterizar uma GST da classe Alfa de R. microplus (RmGSTA), determinando sua função biológica e sua capacidade antigênica. Para isso, a Escherichia coli (DE3) RIL foi transformada com vetor pET-43a contendo a região codificadora da RmGSTA.  A batéria  foi cultivada em LB e a enzima recombinante expressa adicionando isopropil ?-D-1-tiogalactopiranosida (IPTG) nas concentrações finais de 0,25 ou 1mM e incubação da cultura  a 25 ou 37°C. Amostras do cultivo foram coletadas antes e após 2, 4, 6 e 20 horas a adição do IPTG. A proteína recombinante foi purificada em cromatografia de afinidade a níquel e eluída em concentrações crescentes de imidazol. A atividade enzimática foi analisada usando os substratos 1-cloro-2,4-dinitrobenzeno (CDNB) e 1,2-dicloro-4-nitrobenzeno (DCNB) e o reconhecimento avaliado por soros anti-GST da classe Mu de diferentes espécies de carrapatos. Um coelho foi imunizado com a RmGSTA, para avaliar o potencial  imunogênico. A proteína recombinante foi expressa a 25°C com 1mM de IPTG e  massa molecular prevista de 25kDa, na fração solúvel, como observado por SDS-PAGE e Western Blot. Um protocolo de purificação foi estabelecido, sendo  que a proteina purificada não apresentou atividade enzimática contra os substratos testados, e os soros anti-GST Mu não reconheceram a RmGSTA.  

• Palavras-chave
• Vacina, Glutationa s-transferase, carrapato, Rhipicephalus microplus.
• Modalidade
• Comunicação oral
• Área Temática
• Ciências Exatas - Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia