Análise molecular de Rickettsia spp. em carrapatos (Rhipicephalus sanguineus) de cães domésticos

Análise molecular de Rickettsia spp. em carrapatos (Rhipicephalus sanguineus) de cães domésticos

• Autor
• Keven Natanael de Moura
• Co-autores
• Sara Caroline Dantas Nunes , Taffarel Melo Torres , Ana Carla Diógenes Suassuna Bezerra
• Resumo

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  Rhipicephalus sanguineus é uma espécie de carrapato altamente disseminada em regiões com climas tropical e subtropicais, sendo conhecida por acometer mamíferos, e tem como hospedeiro principal o cão doméstico. Os carrapatos são vetores de patógenos infectantes como Ehrlichia e grupo das Rickettsias, que podem causar a Febre Maculosa em humanos. Neste contexto, o estudo teve como objetivo estabelecer métodos moleculares eficientes para analisar no município de Mossoró, Rio Grande do Norte a presença de riquetsioses em carrapatos de cães e avaliar o estado da região estudada quanto à presença e risco de transmissão dessas riquetsioses. Foram coletados 53 carrapatos em cães domésticos selecionados aleatoriamente, que foram inicialmente identificados e pesados para homogeneização. Após identificação taxonômica, os tubos foram mantidos no freezer a -20 °C até o momento de preparo da amostra para extração, que consistiu em remover as peças bucais do carrapato com uma tesoura esterilizada, evitando a contaminação da amostra com DNA do hospedeiro. Para o protocolo de extração de DNA, 50-100 mg da amostra foi colocada em um tubo cônico, com tampa e homogeneizada em 400 µl de solução tampão Tris-EDTA previamente preparada e esterilizada. Em seguida foi adicionada 20 µl de proteinase K e 20 µl de SDS 20% para repouso overnight em temperatura ambiente. Após adição de NaCl, houve a centrifugação em 20 °C, por 30 min a 10000g seguido da ressuspensão das amostras, ao sobrenadante coletado foi adicionado isopropanol e armazenado a -20 °C por 1h, seguido de centrifugação a 4 °C por 20 min a 10000g. O pellet obtido foi lavado em etanol 70% e centrifugado a 4 °C por 5 min a 10000g, após a evaporação do etanol em temperatura ambiente o DNA obtido foi ressuspendido em 300-500 µl de água ultrapura e armazenado a -20 ºC. Como resultado foi verificado que o protocolo de extração funcionou e que foi contabilizada no equipamento de nanodrop onde foi analisado que a quantidade de DNA extraído foi suficiente para próxima etapa de amplificação, pois à relação de comprimento de onda estava dentro de 260nm a 280nm, a quantidade de DNA obtido estava entre 207.8 ng/µl a 710.7 ng/µl estando o material acondicionado para finalização da análise molecular e pesquisa das riquetsioses. Como conclusão, as amostras analisadas estavam em boa qualidade, dentro do padrão desejado, enfatizando a importância para se conhecer o risco das riquetsioses na região, ainda sem nenhum estudo relevante realizado.

• Palavras-chave
• Ectoparasito, Saúde Pública, Biologia Molecular.
• Área Temática
• Ciências Biológicas

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