Efeito de alterações de membrana como uma possível causa de neurodegeneração em células de neuroblastoma 2a

Efeito de alterações de membrana como uma possível causa de neurodegeneração em células de neuroblastoma 2a

• Autor
• Yandara Akamine Martins
• Co-autores
• Andréa da Silva Torrão
• Resumo

• INTRODUÇÂO: Alterações estruturais, biofísicas e bioquímicas de membrana afetam diretamente a função cerebral e têm sido apontadas como fatores envolvidos nas fases iniciais de diversas doenças neurodegenerativas. As proteínas de membrana parecem ter sua atividade, localização e afinidade por ligantes afetadas pela composição lipídica das membranas celulares. Receptores de insulina (RI) periféricos apresentam redução em número, atividade e afinidade pela insulina com a redução do colesterol e da fluidez de membrana. Falhas na via de sinalização desse hormônio foram relacionadas a danos ao metabolismo da glicose, estresse oxidativo, neuroinflamação, cascatas pró-apoptóticas e distúrbios no processamento do peptídeo ?-amiloide e no metabolismo da tau no sistema nervoso central. OBJETIVO: Avaliar como alterações de composição e fluidez de membrana afetam a via de sinalização da insulina em uma linhagem de células neuronais. MÉTODOS: Células de neuroblastoma da linhagem neuro-2a serão expostas a metil-?-ciclodextrina (M?CD) e ao complexo colesterol-M?CD para remoção e adição aguda de colesterol nas membranas, respectivamente, e a sinvastatina para deleção crônica de colesterol. A eficácia da modulação dos níveis de colesterol será determinada por um kit de dosagem de colesterol. A viabilidade celular será determinada pela técnica do MTT. A fluidez de membrana será determinada pelas sondas fluorescentes DPH e TMA-DPH. A avaliação da via de sinalização de insulina será determinada pelo immunoblotting de proteínas da via. (CEUA 8323251119) RESULTADOS PRELIMINARES: Foi observado um aumento de 4, 14 e 11% da viabilidade celular em células expostas à M?CD (30 minutos nas concentrações de 1, 2,5 e 5 mM, respectivamente), em relação ao grupo controle (n=3), podendo indicar uma interferência no método do MTT. Para confirmação dos resultados, a viabilidade foi avaliada também pela técnica de azul de tripan (concentrações de 2,5 e 5 mM; n=1), na qual foram observados resultados opostos ao MTT. Novos experimentos de viabilidade utilizando o tripan serão realizados para confirmar os resultados obtidos.

• Palavras-chave
• Neurodegeneração, Membrana Celular, Via de sinalização da Insulina
• Área Temática
• Neurofisiologia