AMPLIFICAÇÃO E OTIMIZAÇÃO DE ENSAIO DE PCR EM TEMPO REAL DO GENE MIOSTATINA (MSTN) PARA CURIMATÃ (Prochilodus nigricans)

  • Autor
  • Andreza Araujo de Sousa
  • Co-autores
  • Rairiana Simone Rocha Pereira , Daniela Rocha Pereira , Debora Sayumi Doami Melo , Igor Guerreiro Hamoy , André Luiz Alves de Sá
  • Resumo
  • A pesca se mostra uma das práticas de maior relevância exercidas na Amazônia, sendo fonte de alimento e oportunidade de comércio e renda. A espécie Prochilodus nigricans, originária da bacia Amazônica, no entanto foi disseminada, em diversas bacias hidrográficas do Brasil, tendo alta relevância socioambiental para o país. Em peixes, a miostatina (MSTN), gene pertencente à superfamília dos fatores de crescimento TGF-?, é expressa em diversos tecidos e órgãos, além de atuar na regulação negativa do desenvolvimento muscular. A RT-qPCR, ferramenta importante para o estudo da expressão gênica, torna possível comparar os níveis de expressão de diferentes genes em amostras biológicas distintas. Sendo assim, este estudo teve como objetivo estabelecer um protocolo de RT-qPCR para quantificar a expressão gênica do gene miostatina (MSTN) para P. nigricans. Foram coletados na fazenda São José no municipio de Tailândia- PA, 6 animais no início do experimento e 18 animais após 30 dias, nove destes alimentados com dieta controle e outros nove com a dieta contendo torta de dendê. Os animais foram anestesiados via imersão para retirada do tecido muscular e armazenados em 0,8 mL de RNAlaterTM. Foram analisados pares de primers com maiores probabilidades de amplificação dos genes a partir da sequência conservadas do MSTN em ordem Characiformes, posteriormente sendo realizada uma nova projeção de primers específicos para o P. nigricans. O RNA foi extraído pelo método Trizol, em triplicata para cada variável, e tratadas com DNAse. Após a quantificação do RNA, foi realizada em triplicata, a RT-qPCR para o gene MSTN, tendo os genes 18S e GAPDH como endógenos. Todas as reações foram executadas utilizando o CFX96 TouchTMReal-Time Detection System. As condições para RT-qPCR foram: transcriptase reversa ativada a 48 ° C por 30 minutos, denaturação a 95 °C por 15 minutos, anelamento a 60 °C por 15 segundos e extensão a 60 °C por 1 minuto. Os resultados foram estimados pelo método 2-??Ct. Os dados foram submetidos para comparação entre tratamentos realizada através do software GLM Dunnett PROC, com o auxílio do programa SAS e 0,05 de significância. Com base nos resultados obtidos, identificou-se a ineficácia do primer de MSTN encontrado na literatura para a espécie P. nigricans. Já a sequência dos primers MSTN projetados para este estudo obteve eficiência para a RTqPCR. O comportamento da expressão dos genes apresentou distinção no organismo do P. nigricans e o tratamento oriundo da torta de dendê obteve uma baixa expressão de miostatina no músculo, exibindo efeitos benéficos no organismo e rendimento muscular do animal. O protocolo desenvolvido de RT-qPCR para espécie P. nigricans neste estudo foi bem sucedido.

  • Palavras-chave
  • Prochilodus nigricans, Amazônia, Miostatina, RT-qPCR
  • Modalidade
  • Vídeos
  • Área Temática
  • GENÉTICA
Voltar Download

O objetivo do Evento é disseminar a visão holística das ações universitárias da Instituição nos seus diversos Campi, além de trazer uma mostra das discussões técnico-científica que vêm sendo trabalhada na nossa Universidade para toda sociedade paraense.

Nesta edição debateremos o tema “Ciência, Tecnologia e Inovação na Amazônia Pós-Pandemia”. A escolha do tema tem por finalidade proporcionar à comunidade acadêmica discussões sobre as possibilidades de desenvolvimento da Amazônia no âmbito da Ciência e Tecnologia no contexto pós-pandêmico.

Excepcionalmente o IV INTEGRA UFRA ocorrerá de forma virtual, respeitando as indicações de distanciamento social, em virtude da pandemia por COVID-19. Desta forma as apresentações dos resumos serão de forma assíncronas e palestras serão transmitidas ao vivo, por meio de sessões virtuais.

Comissão Organizadora

Prof. Dr. Allan Klynger da Silva Lobato
Prof. Dr. Fabio Israel Martins Carvalho
Prof. Dr. Allan Douglas Bento da Costa
Dimas Oliveira da Silva
Tatianne Feitosa Soares

Comissão Científica

Prof. Dr. Allan Klynger da Silva Lobato
Prof. Dr. Fabio Israel Martins Carvalho
Prof. Dr. Allan Douglas Bento da Costa

 

Divisão de Programas Institucionais - DPI

A DPI é responsável pela operacionalização e controle das atividades relacionadas aos programas institucionais de pesquisa, de iniciciação científica e/ou tecnológica, de desenvolvimento tecnológico e inovação da UFRA.

e-mail:

dpi.proped@gmail.com

pibic@ufra.edu.br