Deleção do gene trp1 de Saccharomyces cerevisiae para construção de linhagem auxotrófica.

Deleção do gene trp1 de Saccharomyces cerevisiae para construção de linhagem auxotrófica.

• Autor
• ALICIA BEZERRA MARTIM DA SILVA
• Co-autores
• Fernanda Cristina Bezerra Leite
• Resumo

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  A utilização de leveduras em aplicações biotecnológicas é cada vez mais crescente. A levedura Saccharomyces cerevisiae tem sido utilizada na produção de proteínas heterólogas, em consequência das características de fácil manipulação e rápido crescimento em meio de cultivo barato em altas densidades celulares. A deleção do gene trp1 é importante fator nas linhagens de Saccharomyces cerevisiae, pois leva a auxotrofia ao triptofano, com isso, o gene pode ser utilizado como marca de seleção. No entanto, a mutação de ponto do gene trp1, descrita para a linhagem EBY100, é passível de sofrer reversão fenotípica, dificultando  construções com a linhagem EBY100, isto é, acarretando resultados falsos positivos nos ensaios de transformação. Nesse contexto, o objetivo desse trabalho é realizar a deleção de gene TRP1 no genoma de EBY100 para a construção de linhagem auxotrófica por meio do sistema Cre-loxP. A estratégia envolve a construção de cassete de deleção com a marca de seleção, flanqueado por dois sítios loxP e homologias 5’ e 3’ de 300 pb H1(TRP1)_LoxP_KanMX_LoxP_H2(TRP1). Quando ocorre a recombinação homóloga, o cassete de deleção substitui o gene trp1 e, em seguida, o vetor pNatCre será expresso contendo a Cre-recombinase, que retira a marca de seleção KanMX após a confirmação de colônias auxotróficas. Entretanto, devido a pandemia do SARS-CoV-2, não houve nenhum desenvolvimento da parte prática do projeto, em contrapartida, realizei a revisão de literatura, bem como mantive participação em outras atividades remotas do laboratório durante o período.

   

• Palavras-chave
• Saccharomyces cerevisiae; Sistema Cre-LoxP; deleção de gene; Auxotrofia.
• Área Temática
• Biologia (SEDE)