Ancoragem do epítopo de NS1 de ZIKV na superfície celular de Saccharomyces cerevisiae

Ancoragem do epítopo de NS1 de ZIKV na superfície celular de Saccharomyces cerevisiae

• Autor
• Eduardo Vinícius Albuquerque Lourena
• Co-autores
• Crislaine Kelly da Silva Rocha , Danielli Batista Bezerra Cajueiro , Diogo Ardaillon Simões , Fernanda Cristina Bezerra Leite
• Resumo

• A ancoragem de antígenos recombinantes à superfície celular da levedura Saccharomyces cerevisiae é uma alternativa atrativa para o desenvolvimento de imunorreagentes. Nos sistemas de ancoragem mais comuns, a proteína heteróloga de interesse é fusionada a uma âncora nativa da levedura que se liga à parede celular permitindo a exposição do antígeno. No presente projeto de IC, pretende-se construir uma linhagem recombinante da levedura Saccharomyces cerevisiae capaz de expressar e ancorar à sua superfície celular a extremidade C-terminal da proteína NS1 de ZIKV, visando uma promissora utilização deste antígeno para fins de diagnóstico (i.e. permitindo a imunodetecção específica de anticorpos). A linhagem será obtida através da estratégia de clonagem USER, onde os vetores e os insertos são amplificados com primers contendo uma uracila na sua região 3’ e em seguida tratados com o reagente USER™, de modo a gerar extremidades coesivas.  As análises  in silico demonstraram a necessidade de se ancorar o antígeno na posição C-terminal, assim, foi escolhido um novo vetor de ancoragem a ser utilizado nas clonagens, o pCHA. Foram desenhados primers para clonagem USER com o novo vetor e sua modificação para padronização dos resultados do grupo de pesquisa, como a inserção do peptídeo sinal e da tag de histidina (6x His) em sua sequencia. Foram realizadas PCRs preliminares para definição dos parâmetros da reação como a temperatura de anelamento dos primers. No entanto, após algumas tentativas, concluiu-se que era necessário utilizar outra enzima tolerante a uracila para realizar as clonagens, o que custou cerca de 45 dias das atividades do plano. Apesar de já ter funcionado com outra enzima, os mesmos parâmetros e utilização de mix, e programação otimizados de reação de PCR não funcionaram para amplificar o vetor para a clonagem USER.

• Palavras-chave
• Engenharia genética, ZIKV, Ancoragem de proteínas
• Área Temática
• Biologia (SEDE)