Efeito da co-expressão do transportador de ureia UT-A3 e do canal para água AQP2 na permeabilidade osmótica à água, quando expressos na membrana dos oócitos da rã Lithobates catesbeianus

• Autor
• Neydiana Pina-Lopes
• Co-autores
• Raif Musa-Aziz
• Resumo

• A produção de uma urina mais concentrada que o plasma pelos rins?importante para a manutenção do balanço hídrico do organismo?depende da geração e manutenção de um gradiente osmótico ao longo do eixo córtico-medular e do aumento da permeabilidade do ducto coletor cortical (DCC) à água, sendo ambos os processos regulados na presença do hormônio antidiurético (HAD). O gradiente osmótico é dado pelo acúmulo no interstício medular de NaCl?reabsorvido no segmento ascendente espesso da alça de Henle, impermeável à água, via cotransportador Na⁺-K⁺-2Cl^-?e ureia?reabsorvida pelas células principais do ducto coletor medular interno (DCMI) via transportadores de ureia UT-A1, na membrana apical, e, UT-A3, nas membranas apical e basolateral. O aumento da permeabilidade do epitélio DCC à água depende do HAD que leva a inserção de aquaporinas 2 (AQP2) na membrana apical das células principais e, com isso, ocorre reabsorção de água do DCC para o interstício medular, mais concentrado. Estudos feitos no nosso laboratório demonstram que UT-A3 também transporta água, além de ureia, indicando que essa proteína poderia contribuir com o aumento da permeabilidade à água do epitélio do DC. Desse modo, nesse trabalho investigamos o efeito da co-expressão de UT-A3 e AQP2 na permeabilidade osmótica à água (P_f) em oócitos da rã Lithobates catesbeianus. Para isso, oócitos isolados foram injetados com cRNA para expressão de UT-A3 de camundongo (m), AQP2 de rato (r), mUT-A3 + rAQP2 ou H₂O (oócitos controle). A expressão de mUT-A3 (com epítopo c-Myc) e/ou rAQP2 na membrana do oócito foi avaliada por experimentos de biotinilação e “western blot”, utilizando o anticorpo anti-cMyc ou anti-rAQP2. A P_f dos oócitos foi computada por meio de microscopia de vídeo-imagem para registrar o aumento do volume celular de grupos de oócitos colocados em uma solução hipotônica (70 mOsm/L). As mudanças subsequentes no volume da célula foram usadas para calcular a P_f (cm/s) (CEUA nº 7971160519). Os ensaios de “western blot” das amostras biotiniladas dos oócitos injetados com cRNA para mUT-A3, rAQP2 ou mUT-A3 + rAQP2 revelaram bandas imunorreativas consistentes com o peso molecular de mUT-A3, com e sem glicosilação, e de rAQP2, sem glicosilação. O valor médio da P_f dos oócitos controle injetados com H₂O foi significativamente menor (p <0,0125) quando comparados aos oócitos injetados com cRNA para a expressão de mUT-A3 ou rAQP2. Curiosamente, oócitos injetados com mUT-A3 + rAQP2 apresentaram valores de P_f significativamente maiores do que àquelas dos oócitos injetados apenas com mUT-A3 ou rAQP2. Portanto, é plausível que o transporte de água mediado por UT-A3 no DCMI, em conjunto com o transporte de água pelas AQP2 no DCC, possa potencializar a reabsorção de água no sistema de DC quando os níveis de HAD estão altos, como ocorre em condições fisiológicas em que o organismo precisa conservar água, como na desidratação. Agências de fomento: FAPESP, Projeto: 2018/22855-1 e CNPq, Projeto: 832347/1999-0.  

• Palavras-chave
• oócitos de Lithobates, transporte de água, aquaporinas, transportadores de ureia, co-expressão
• Modalidade
• Comunicação oral
• Área Temática
• Fisiologia Renal

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