Ouabaína, angiotensina II e ciclooxigenase-2: interações celulares no controle da fisiopatologia vascular

• Autor
• Henrique Charlanti Reis Assunção
• Co-autores
• Luciana Venturini Rossoni
• Resumo

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  A Ouabaína (Oua) é um glicosídeo cardenolídeo, encontrado no reino vegetal e em mamíferos, incluindo humanos. Sua ação primária é a inibição da atividade da Na⁺-K⁺-ATPase (NKA). Sua interação com a NKA também é capaz de regular proteínas quinases, por meio de sua atividade signalossome, promovendo diversos efeitos celulares, como hipertrofia, produção de óxido nítrico (NO) e espécies reativas de oxigênios (ERO). Níveis altos desse glicosídeo estão associados com diversas patologias, como hipertensão arterial e insuficiência cardíaca. Modelos experimentais com administração crônica de Oua corroboram para essa ação hipertensiva, demonstrando aumento sustentado na pressão arterial, alterações na reatividade vascular e induzindo também remodelamento vascular, estes últimos altamente leito-específicos. Também se observa nesse modelo hipertensivo que as ações nos vasos da Oua interagem ou dependem de angiotensina II (AII) ou da ciclooxigenase (COX)-2, ou ambas. Essa capacidade da OUA já foi demonstrada em diferentes tipos de células, tecidos e sistemas. Somado a tudo isso, a sinalização intracelular da Oua e da AII possuem diversos pontos em comum, como por exemplo a cSRC, o EGFR e ERO, e existem evidências da necessidade do receptor de AII do tipo 1 (AT1R) nos efeitos da Oua em células renais. O conhecimento das interações entre Oua, AII e COX-2 em vasos pode propiciar melhor conhecimento da ação desse hormônio, e estudos de Oua em células endoteliais ainda são escassos. Portanto, presente projeto visa avaliar a sinalização da ouabaína em célula endotelial, e possíveis convergências e interações com as vias de AII e COX-2. Para isso, será realizado uma curva concentração-resposta de Oua em células de endotélio humano (EA.hy926), em diferentes tempos e concentrações, avaliando a fosforilação de cSrc no resíduo de Tyr418, por ser a primeira da via do signalossome. Com a(s) concentração(ões) e tempo(s) que obtiverem melhores resultados, será avaliado em detalhe a participação da Ang II e da COX-2, por meio dos inibidores de enzima conversora de AII (ECA) e COX-2, e do bloqueio do AT1R; outra metodologia será a utilização de RNA interferente pequeno, para promover o silenciamento de AT1R e COX-2. Também será utilizada rostafuroxina, droga que bloqueia a via do signalossome da Oua. Os aspectos avaliados serão: expressão gênica e proteica das vias envolvidas, por meio das técnicas de qRT-PCR e Western Blot; síntese e liberação de NO, ERO, usando sondas fluorescentes; síntese e liberação de prostanoides e AII, utilizando kits de ELISA; e, proliferação celular. Agências de fomento envolvidas: CNPq e FAPESP. O projeto utilizará de células de linhagem, e portanto é isento de Comitê de Ética.

• Palavras-chave
• ouabaína; angiotensina II; ciclooxigenase-2;endotélio; sinalização intracelular
• Modalidade
• Comunicação oral
• Área Temática
• Fisiologia Cardiovascular

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