PADRONIZAÇÃO DA SEMI-NESTED PCR EM TUBO ÚNICO (SNTU-PCR) PARA DETECÇÃO DE CRYPTOSPORIDIUM SPP. VEICULADOS POR ÁGUA

PADRONIZAÇÃO DA SEMI-NESTED PCR EM TUBO ÚNICO (SNTU-PCR) PARA DETECÇÃO DE CRYPTOSPORIDIUM SPP. VEICULADOS POR ÁGUA

• Autor
• Maria Aparecida Moraes Marciano
• Co-autores
• Laís Fernanda de Pauli Yamada , Maria Luisa Barbosa
• Resumo

• Introdução: As doenças de veiculação hídrica, causadas por protozoários intestinais, emergiram como um dos principais problemas de Saúde Pública, causando mais de 2,2 milhões de mortes por ano. O aprimoramento da qualidade da água e das condições de saneamento e higiene podem impedir a morte de mais de dois milhões de crianças anualmente. Cryptosporidium spp. está entre os principais protozoários patogênicos relacionados a surtos epidêmicos, porém, seu monitoramento é dificultado pelas condições intrínsecas das amostras de água. De acordo com a Portaria GM/MS Nº 888, de 4 de maio de 2021, no Brasil, toda água destinada ao consumo humano, deve estar sujeita a controle e fiscalização. O monitoramento aliado a técnicas capazes de detectar oocistos de Cryptosporidium spp. em águas destinadas ao consumo humano são de extrema importância para elucidação de surtos diarreicos, em creches, abrigos, entre outros. Objetivo: Este estudo teve como objetivo padronizar metodologia molecular para detecção de Cryptosporidium spp. em amostras de água destinadas ao consumo humano, utilizando técnica molecular denominada “SNTU-PCR”, que permite otimizar a reação em um único ciclo. Método: Para esta pesquisa foram desenhados 3 iniciadores moleculares, denominados CryIAL1(F) / CryIAL2(F) / CryIAL3(R) que amplificam um fragmento do gene da parede de oocisto de Cryptosporidium spp., para a detecção em amostra de água contendo oocistos. Foi adicionada uma etapa inicial de 20 ciclos para o anelamento dos iniciadores CryIAL1(F) e CryIAL3(R) em temperatura de 61 °C, seguida de um intervalo de 4 °C por 2 min. e posterior adição de 35 ciclos a 56°C para anelamento dos iniciadores CryIAL2(F) e CryIAL3(R). Para avaliar a identidade dos iniciadores, o fragmento resultante do par CryIAL2 (F) e CryIAL3 (R) foi sequenciado. Resultados: A SNTU-PCR, utilizando os iniciadores moleculares CryIAL1(F) / CryIAL2(F) / CryIAL3(R), foi eficiente na detecção dos oocistos, obtendo produto amplificado de 531 pb. Os resultados mostraram que a SNTU-PCR é eficiente e pode ser aplicada na elucidação de surtos epidêmicos. É vantajosa porque não exige a manipulação do produto amplificado, diferentemente da nested PCR, além de favorecer a economia de reagentes onerosos. Conclusão: Esta padronização permite que o Núcleo de Morfologia e Microscopia do Instituto Adolfo Lutz auxilie na elucidação de surtos epidêmicos, corroborando com as ações das vigilâncias sanitárias e epidemiológica.

   

• Palavras-chave
• PCR, surtos, Cryptosporidium spp., Qualidade da água
• Modalidade
• Pôster
• Área Temática
• Protocolos para diagnóstico laboratorial de DTHA

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